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糖類分析方法
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作者:henobio
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發(fā)布時間: 2014-12-25
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糖類分析方法
絕大多數(shù)的糖類物質(zhì)無紫外吸收，所以不能很好地使用UV檢測器測定。其檢測手段目前常見的主要有以下三種。1．示差折光檢測器RI
RI是一種通用型檢測器，具有廣泛的使用范圍，它對沒有紫外吸收的物質(zhì)，如高分子化合物、糖類、脂肪烷烴等都能夠檢測。RI還適用于流動相紫外吸收本底大，不適于紫外吸收檢測的體系。在凝膠色譜中RI是必不可少的，尤其是對聚合物分子量分布的測定。利用GPC+RI+標(biāo)準(zhǔn)品，我們可以得到被測物質(zhì)的相對分子量。
日本Shodex公司的SHODEX? RI-101檢測器是一種新概念示差折光檢測器， 它使用微處理器，使得從溶液置換到基線穩(wěn)定核查能夠自動進(jìn)行，穩(wěn)定快速。Shodex?RI-101與以往不同的高效液相色譜用示差折光檢測器相比，具有以下的特長：
* 優(yōu)越的操作性：獨特的快速平衡功能，在30分鐘內(nèi)自動平衡基線。檢測器配備彩色液晶顯示器， 易于分析人員一眼就看到操作狀態(tài)和基線傾向；自動啟動功能，使之可自動進(jìn)行從參比池的溶液置換到基線穩(wěn)定性核查的復(fù)雜操作；用幫助功能，很容易確定和校對裝置。
* 出眾的穩(wěn)定性：通過溫度調(diào)節(jié)方式的最優(yōu)化，電源打開后穩(wěn)定化時間縮短，并可獲得出眾的基線穩(wěn)定性。
* 安全措施：檢測器配備泄漏感應(yīng)器，萬一溶劑泄漏，泵可以自動停止。
* 多種自動功能：檢測器設(shè)有外部輸入輸出端子以及RS232C通道端口，把檢測器與各種液相色譜組合能實現(xiàn)高度自動化。
* 由于快速自動啟動功能，達(dá)到穩(wěn)定時間被減半。檢測器穩(wěn)定可在彩色顯示器上自動測定核查。
2.粘度檢測器
高聚物溶液中的[η]與分子量之間存在著以下定量關(guān)系：
3．光散射檢測器（LS）
光散射技術(shù)測定高聚物的重均分子量（按分子重量統(tǒng)計平均得到的分子量），是當(dāng)前應(yīng)用較為廣泛的一種方法。凝膠色譜分離－光散射檢測器的結(jié)合不但可以直接測量大分子的絕對分子量及分布，還可以得到分子形狀、動力學(xué)半徑、枝化度等信息。
美國PD公司的PD2000系列的光散射完全與70年代的小角光散射和80年代的多角光散射不同。小角光散射是忽略角度，只進(jìn)行濃度外推。多角光散射是忽略濃度。PD的光散射利用得拜公式，用角度和濃度同時參與計算。PD2000家族的儀器提供溶液中的聚合物和生物高分子新的精確的數(shù)據(jù)——絕對分子量、尺寸、形態(tài)和其他的特征參數(shù)。
它具有以下優(yōu)點：
①高靈敏度；
②極好的重復(fù)性；
③高精度；
④易于操作；
⑤快速從復(fù)以前的試驗結(jié)果；
⑥易于拆卸清洗；
⑦長期穩(wěn)定工作；
⑧較小的池體積（10微升），與RI聯(lián)用引起峰加寬效應(yīng)??；
⑨采用聚焦光路，可以將散射體積見到最小，得到很高的信噪比。
其適用范圍涉及：
1)仿生學(xué)和醫(yī)藥；
2)塑料和其他的聚合物；
3)蛋白質(zhì)和多糖類；
4)油漆和涂料；
5)石油化學(xué)制品；
6)潤滑油；
7)添加物 ；
8)食品生產(chǎn)；
9)環(huán)保等，政府，并且其他實驗室。
最新分離測試技術(shù)
除了常見的HPLC分離模式之外，現(xiàn)在又新興起了場流分離色譜（FFF），也可以用來進(jìn)行多糖的分離。非對稱場流分離色譜（AF4）屬于FFF家族的一員，是一個新的、有效快速分離和準(zhǔn)確描述不同的粒子和大分子的方法。它最早在幾年前在文獻(xiàn)上有報道，是一個新的與色譜類似的分離技術(shù)，分離范圍用來從103到1012道爾頓。
德國POSTNOVA公司HRFFF 10.000系列非對稱場流分離色譜是以非對稱場流分析原理為基礎(chǔ)來工作的，是一項用來分離和表征流體中粒子和大分子的新穎和有效率的分離方法，它是世界上最早的全自動化AF4系統(tǒng)。該系統(tǒng)標(biāo)準(zhǔn)的配置包括不同的泵、檢測器、自動進(jìn)樣器等。10.000系列系統(tǒng)能通過樣品分子尺寸大小的差異來實現(xiàn)分離并檢測分子量、Rg、Rh等。其應(yīng)用范圍包括生物技術(shù)、多糖、藥物、蛋白質(zhì)、抗體、環(huán)境科學(xué)、材料科學(xué)等。
HRFFF 10.000優(yōu)勢包括：
* 不使用固定相，分離迅速準(zhǔn)確
* 直接進(jìn)樣，沒有必要的樣品預(yù)處理步驟
* 適用于不同的分離條件水相和有機溶劑，分子量和尺寸測定范圍大且容易得到
* 快速分離復(fù)雜的聚合物、粒子和膠體體系
* 分離中小的作用力能保護(hù)樣品的生物活性